+ 网站首页 + 收藏本站 + 设为首页 + E-mail
中医养生
中医美容
美容研究
最新文章
论文--绿茶化妆品 
您现在的位置:首页 >->美容研究
〖返回上一页〗 加入时间:2010-2-28 浏览次数:7043
                                              
绿茶面膜的安全性评价
 
贺孟泉   梁虹1
 
(青岛大学医学院,青岛   266021)
 
摘要 为确保绿茶面膜使用的安全性,并为产品应用提供实验依据,对绿茶面膜的皮肤毒理学进行研究。应用豚鼠皮肤急性毒性、刺激性和过敏性等实验,对绿茶面膜进行安全性评价。结果表明,绿茶面膜(5倍)对豚鼠完整皮肤未引起急性毒性反应;单次和多次应用实验皮肤未出现红斑和水肿,病理检查,皮肤结构完整,层次清晰;经致敏接触和激发接触,2.4---二硝基氯茶组(DNCB)皮肤最大平均反应值为 1.3 ,致敏率为100%。绿茶面膜组皮肤最大平均反应值为0.1,致敏率为5%。提示该产品未引起皮肤急性毒性反应,无刺激性,为轻度致敏物。
关键词   茶多酚;面膜;皮肤毒理学。
 
              The safety study on Tea-polyphenols Face Pack
                      He meng quan.    Liang hong
                (Qingdao University Medical college, Qingdao 266021)
 
Abstract:To further study the safety of Tea polyphenols face pack and provide experimental  data for the usage of it。 It was used to do the acute toxicity test, irritation test and allergic  reaction on the skin of guinea pigs. The results showed that it had no acute toxicity reaction. Single tests did not cause swollen or redness of the skin It has no irritation effect on the skin.  The guinea pigs maximum average of 2.4—dinitro—chlorobeuzene (DNCB) was 1.3 and the  allergic reaction rate was 100% by sensitization contact and excited. The guinea pigs  maximum arerage of Tea-polyphenols face pack was 0.1and the allergic reaction rate was 5%.  It has no irritatire and asute toxic effects on the skin of guinea Pigs. It is a light hypersensitivity   agent.
Key.words:Tea -polyphends; face pack; safety evaluation.
 
     人及动物的体表几乎完全被皮肤覆盖,其总表面积居于小肠和肺泡总表面积之间。因此,皮肤是机体同外界环境接触的第一道防线,是机体重要的保护层。随着化学工业的发展,皮肤可能接触的各种化学物质在增多。尤其是化妆品,引起各种皮肤病的发病率也在逐年增多。绿茶面膜是以茶多酚为活性成份配制而成的一种新型美容面膜,为确保使用的安全性,并为产品应用提供实验依据,课题组对绿茶面膜进行皮肤毒理学研究,以正确评价其对皮肤毒性作用的性质及危险度。
1、材料和方法
1.1材料
   2.4-二硝基氯苯,上海试制一厂产品,批号9601378;面膜基质、绿茶面膜均由青岛大学医学院医学美容化妆品研究室自制;无水面精为青岛江山化学试剂厂产品,批号980805;白色豚鼠购自上海医学实验动物调剂服务处(0000496)。
1.2 急性皮肤毒性实验
   白色豚鼠40只,雌雄各半,体质量272.4±28.8g,随机分为基质组和面膜组(5倍)。实验前24h剃除动物躯干背部拟染毒区域的被毛,约为30-40cm2。将受试物(1g)均匀涂敷于动物背部,封闭接触24h。连续观察15d内豚鼠的活动、饮食。体重变化和死亡情况及局部皮肤和全身的中毒反应1
1.3、急性皮肤刺激实验
   取成年、健康、皮肤无损伤的白色豚鼠16只,雌雄各半,体质量304.7±30.8g。实验前24h常规方法剃毛。采用自身对照设计,左侧给予面膜(5倍),右侧给予基质(各1g)。保鲜膜包裹24h.。温水清除受试物后,即刻观察1h、24、48h、72h至7d涂持部位的皮肤反应2。按文献方法3,4,进行皮肤反应积分和刺激强度评价。
1.4、多次皮肤刺激性实验
   采用配对设计,将6号豚鼠(雌雄各半,体质量314.3±29.7)常规方法脱毛,于左、右两侧脱毛区分别涂以基质和面膜(0.5g),每日1次,连续14d,逐日观察皮肤局部红斑和水肿反应,计算每日每只动物平均积分,确定其皮肤刺激强度分级。14d后,将豚鼠处死,分别取下背部脊柱两侧涂抹部位的皮肤,以Bours液固定,梯度脱水,常规石蜡包埋,H、E染色行光镜镜检。
1.5、皮肤变态反应实验
   体质量为264.5±27.6g的白色豚鼠60只,雌雄各半,随机分为3组:基质组、面膜组、阳性对照组(2.4-二硝基氯苯组)。实验室喂养3d,以适应环境。按文献方法1,采用局部封闭涂皮肤,在豚鼠背部左侧脱毛区进行致敏接触。未次诱导后14d。将受试物分别除各种动物右侧脱毛区,进行激发接触。计算反应平均值。
        反应平均值= 红斑总数+水肿形成总数 
                  合计动物数
        实验期间纪录并给制豚鼠体质量的增长曲线。
2、结果
2.1、皮肤急性毒性试验
    在皮肤急性毒性试验期间,小鼠活动自如,饮食良好,皮毛光泽,粪便正常,体质量的经时变化组间无明显差异,也未见全身急性中毒反应。见表1:
        表1  绿茶面膜外用于完整皮肤对豚鼠体质量的影响(x±s)
组别
例数
实验前
实验后
基质对照组
 
20
268.7±25.3
336.5±28.6
绿茶面膜组
20
270.9±29.7
340.1±30.5
        与对照组比较,P>0.05
2.2、急性皮肤刺激试验
除去受试物可见局部胶布固定的痕迹,绿茶面膜5倍剂量组的刺激反应,仅有1/8,且为勉强可见红斑,6h后消退。根据皮肤刺激性反应评分标准,计算其刺激强度为0.2,见表2:
                           表2、绿茶面膜的急性皮肤刺激分级:
组别
N
     1h          6h         24h         48h           72h         7d
 红斑  水肿  红斑  水肿  红斑  水肿  红斑  水肿   红斑  水肿  红斑  水肿
基质组
8
  0/8   0/8   0/8    0/8   0/8    0/8    0/8   0/8    0/8   0/8
绿茶面膜组(5倍)
8
  1/8   0/8   0/8    0/8   0/8    0/8    0/8   0/8    0/8   0/8    0/8   0/8
2.3、多次皮肤刺激试验
绿茶面膜在对皮肤多次刺激性试验期间,连续观察皮肤反应,即未出现红斑,也未出现水肿,皮肤刺激反应积分为0,脱屑积分为0,最高刺激指数为0。病理组织学检查结果表明,两侧的皮肤组织结构完整,层次清晰,除皮肤棘层和颗粒层轻度增厚外,其它均未见明显组织形态学变化。
2.4、皮肤变态反应试验
阳性对照组(DNCB组)动物皮肤受试区激发给药后6h,18/20出现红斑反应,其中16/20出现中度红斑(雌雄各8只),2/20轻度红斑无水肿。24h后,除轻度红斑外,轻度水肿为4/20,8/20为中度红斑,4/20为轻度红斑,致敏率达100%。48h后,轻、中度红斑各为2/20,水肿消退。48h后,轻、中度红斑各为3/20,72h后恢复正常。绿茶面膜组动物皮肤受试区激发给 6h,反有2/20为轻度红斑,致敏发生率为10%。
平均反应值见图1:
3  讨论
    由于动物物种不同造成了皮肤反应差异,据报,皮肤反应的敏感顺序为兔〉豚鼠〉大鼠〉人〉猪,所以兔和豚鼠皮肤的敏感性高于人6。本文以豚鼠为受试对象,进行绿茶面膜的皮肤急性毒性研究,对确定其能否经皮肤渗透和短期作用所产生的毒性反应有重要意义。研究证明经皮肤给予绿茶面膜(5倍剂量),对豚鼠未引起急性毒性反应,体质量的经时变化呈增长态。皮肤刺激是指受试物短期接触动物皮肤后产生的局部可逆性的炎症变化。绿茶面膜的急性皮肤刺激试验,是观察一次性皮肤涂擦其后局部产生的炎性反应。该产品的刺激强度为0.2,根据文献标准3,4,皮肤刺激强度在〈0.5时,可确认为无刺激性。由于试验中使用的是封闭接触,这是一种超常试验条件下的试验,而人体在实际涂面膜时很少存在这种方式,从而证实该产品对豚鼠的完整皮肤无急性刺激作用。绿茶面膜多次皮肤刺激性试验结果表明,每天每只动物平均积分为0,病理组织示检查结果提示,绿茶面膜对白色豚鼠完整皮肤不易引起慢性刺激。
    皮肤变态反应是皮肤对一种化学物质产生的免疫性反应,在人类这种反应可能以骚痒、红斑、丘疹、水疱,融合水疱为特征。动物的反应不同,可能仅见到红斑和水肿。本研究结果亦证实,白色豚鼠皮肤过敏反应仅见皮肤红斑和水肿反应。
    近年的研究表明:化学物质致敏作用机理除Ⅳ型迟发性细胞免疫外,郎格旱细胞(LC)对皮肤产生接触性变态反应起着关键作用。化学物质在穿透皮肤过程中作为半抗原,与体内某些特定的载体蛋白共价结合,形成完全抗原,结合于表皮郎格罕细胞的细胞膜上或与巨噬细胞相结合,激发抗体形成及免疫记忆过程。郎格罕细胞表达免疫识别功能且在其细胞膜上有IgG和C3受体。这些细胞能吸附小分子且将它们代谢成更有活性的半抗原性产物7、8。故本文用已知的抗原性物质DNCB重复涂皮,经诱导和激发接触,成功建立了免疫系统反应摸式豚鼠皮肤变态反应。由于本实验的致敏途径与实际接触方式相似,根据绿茶面膜的致敏率按国家标准3,确认绿茶面膜为Ⅰ级――弱致敏物,实验前、中、后期各组豚鼠体质量均在增长,组间无统计示差异(P>0.05),提示绿茶面膜在皮肤变态反应实验期间不影响豚鼠的体质量。
 
                                 参考文献
1、宋爱国、杨根源、陈勉哉编译,化妆品原料技术标准。北京:中国轻工业出版社。1994:613-629。
2、陈奇主编,中药药理研究方法学。北京:人民卫生出版社,1994:164-167。
3、中华人民共和国国家标准GB7917-87。
4、王治乔、袁伯俊主编。新药临床前安全性评价与实践。北京:军事医学科学出版社,152-154。
5、徐叔云、陈修主编。药理示实验方法。北京:人民卫生出版社,1994:201-228。
6、周宗灿主编。毒理学基础。北京:北京医科大学出版社。2000:83-87。
7、Hayes  AW  Principle   and  Methods  of  Toxicology   3rd   Raren  Press, New  York  1994:137-150。
8、Anderson  D  and  conning  DM.  Expermenfal  Toxiuology.  The  Basic  Issues, 2nd  ed.  Royod  society  ofchemistry.  1993:  67-82. 
 

中国轻工总会科技发展部:

轻工业科技计划项目合同。合同编号:轻科96028

1:湖北省人民医院皮肤科
 
 
 
 
 
 
                     绿茶面膜抗皮肤光老化实验研究
                                 贺孟泉  王春波       
                        (青岛大学医学院 青岛 266021)
摘要: 根据皮肤光老化原理探讨绿茶面膜对光老化皮肤的作用,并为产品应用提供实验依据。
    60只豚鼠随机分为3组:基质对照组、基质光老化组和绿茶面膜光老化组(经皮)  制备豚鼠皮肤光老化病理模型。15周后应用氨基酸自动分析仪,测定豚鼠皮肤组织中羟脯氨酸等多种氨基酸的含量。结果表明,绿茶面膜能提高豚鼠皮肤中羟脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸、胱氨酸和精氨酸的含量(p均≤.05)。提示,绿茶面膜能延缓豚鼠皮肤的光老化。
关键词:茶多酚、面膜、紫外线、氨基酸。
   The Experimental study on anti-solar-aged skim of Tea-polyphenols face pack.
                                  He Mengquan,  Wang chunbo
                       (Qingdao university Medical college,Qingdao,266021)
Abstract:In accordance with the structure in decrepit skin, the anti-solar-aged skin of the Tea-polyphenols face pack were studied for the providing experimental data in usage of it. The guinea pigs (n=60)  were randomly divided into 3 groups: the control group Solar-aged skin group Tea-polyphenols face pack solar-aged skin group. An animal model of solar-aged skin was set up. The amounts of hydroxyproline and amino acids in guinea pigs skin were determined by high speed amino acid analyzee (model 335-50) after 15 weeks, The  results showed that. Tea-polyphenols face pack could increase the amounts of hydroxyproline, glyeine, valine, threonine, serine, cystine, arginine,(P all<0.05).These indicated that Tea-polyphenols face pack could retaid skin  aging by ultraviolet radjation.
Key word: Tea polyphengs, Face pack;  ultraviolet, amino acid. 
 
    现代科学研究表明,太阳光照射下对皮肤产生的影响,主要是紫外线。紫外线照射是引起皮肤衰老的主要原因之一。过量照射还能诱发恶性肿瘤〔1、2〕。因此,预防紫外线对皮肤的损伤是十分重要的,特立题研制绿茶面膜。本文以豚鼠为受试动物,制备光老化病理模型,探讨绿茶面膜对光老化豚鼠皮肤的保护作用。
1、材料
1.1、试剂    绿茶面膜和基质均由青岛大学医学院化妆品研究室提供,批号980823;正辛酸,北京化工厂产,批号77014;三氯化肽、硫二甘醇,日本产,批号分别为8011,9470;巯基乙酸为上海第二军医大学制药厂。
1.2、仪器    UVA和UVB均购自北京东升玻璃光源厂;UVA和UVB型紫外辐照计为北京师范大学光电仪器厂制造;  高速组织匀浆机系江苏海门其林医用仪器厂制造;202-2型电热干燥箱上海市上海县实验仪器厂出品;40型无级调速电动搅拌机为江苏江阴科研器厂产品;835型氨基酸自动分析仪日本产。
1.3、动物    白色豚鼠60只,购自上海市实验动物调制中心,合格证号为0000498         
2、方法与结果
白色豚鼠60只,雌雄各半,体质量为286.2±32.8g,随机分为3组:基质非照射组、基质照射组和绿茶面膜照射组。照射前常规方法剃除豚鼠背部的毛,脱毛范围约(5×6cm),背部给药,日1,连续15周。
模型制备〔3、4照射组动物以豚鼠固定器固定,置模拟日光照射箱内,在距光源35cm处同时进行UVA和 UVB照射。UVB的照射剂量小于最小红斑剂量(MED)的1/2:开始每周照射3次,每次UVA的照射剂量为2.026J/cm2;UVB为0.0064J/cm2: 第4周起每周照射3次,每次UVA的照射剂量为3.376J/cm2;UVB为0.0111J/cm2:8周后每周照射5次,每次UVA的照射剂量为4.727J/cm2; UVB为0.0149J/cm2:连续UV照射15周。末次照射后24h,将各组豚鼠处死,剪下背部脱毛区的皮肤,清除皮肤脂肪等组织后,蒸馏水冲洗滤纸拭干,置37度烘箱中干燥24h,取出剪碎后以丙酮脱脂48h,高速匀浆器制备组织匀浆,干燥后成供测定用样品。
取样品40mg,参照文献方法〔5、6并加以改良,在110℃下盐酸水解,80℃水浴蒸发脱酸,再加0.01mol/L盐酸溶解后,用日产835-50型氨基酸自动分析仪进行羟脯氨酸等多种氨基酸含量测定.
结果见表1、2
 
表1:绿茶面膜对光老化豚鼠皮肤羟脯氨酸含量的影响 (X±s,g/100g)
组别
动物数n
羟脯氨酸
基质非照射组
10
3.85±0.13
基质照射组
10
3.04±0.21Δ
绿茶面膜照射组
10
4.04±0.62*
    △与基质非照射组比较p<0.05          ※与基质照射比较<0.05
 
 
表2  绿茶面膜对光老化后豚鼠皮肤氨基酸的影响
氨基酸含量(g/100g)
基质非照射组
基质照射组
绿茶面膜照射组
缬氨酸  
3.80±0.07
3.59±0.32Δ
3.94±0.23*
苏氨酸
1.77±0.49
1.21±0.07Δ
1.41±0.16*
丝氨酸
1.34±0.05
1.31±0.03
2.13±0.20*
甘氨酸
3.86±0.07
3.91±0.07
4.24±0.33*
胱氨酸
0.59±0.25
0.45±0.15Δ
0.90±0.55*
精氨酸
2.57±0.05
2.64±0.08
3.71±0.66*
组氨酸
1.76±0.07
1.84±0.08
2.02±0.16
赖氨酸
3.45±0.05
3.21±0.06
3.08±0.09
苯丙氨酸
2.54±0.21
2.26±0.05
2.33±0.16
酪氨酸
2.89±0.06
2.84±0.08
2.91±0.14
亮氨酸
3.35±0.04
3.27±0.13
3.20±0.13
异亮氨酸
4.74±0.06
4.50±0.38
4.53±0.66
蛋氨酸
0.74±0.30
0.50±0.16
0.71±0.25
丙氨酸
3.12±0.06
3.02±0.06
3.11±0.08
谷氨酸
5.00±0.04
4.95±0.08
5.02±0.14
天门冬氨酸
2.31±0.21
1.95±0.08
2.03±0.10
 
Δ与基质非照射组比较p<0.05           *与基质照射组比较p<0.05.
 
3、讨论
    皮肤是人体组织与外界环境相连的重要界面,由于环境污染,大气臭氧层遭受侵袭,过多紫外线不仅晴天辐射大地,即使在阴天,大部份紫外线仍可透过云层损伤皮肤。为探讨绿茶面膜对光老化皮肤的保护作用及机制,本文首先建立了豚鼠皮肤光老化病理模型。国内学者应用卤灯,金属卤素灯长期照射豚鼠皮肤。造模多有不便,课题组采用UVA、UVB特殊光源自制的照射箱。模拟人工日光,与实际生活环境更为贴切。
    在紫外线作用下,自由基可以从不饱和类脂形成过氧化物,它们本身又起着系列反应的引发剂作用。皮脂腺源的类脂和表皮类脂,是脂质过氧化物源,其导致皮肤损伤的累积作用,即为光老化的主要原因。〔7〕据此,研制了绿茶面膜,其中的主要活性 成分为茶多酚,具有清除氧自由基和脂类自由基,预防脂质过氧化8,长期应用对皮肤的保护作用,就能延缓皮肤的光老化。
    胶原蛋白是哺乳动物皮肤的主要部分,羟脯氨酸是胶原蛋白特有的氨基酸之一;约占胶原全部氨基酸残基的10%-14%。业已证明,中老年人和老年动物的胶原蛋白溶解度随增令而降低,表明老年胶原蛋白多肽链间的共价交联程度增加,使中老年人和老年动物的皮肤显得干燥,皱纹,失去弹性和光泽,同时,胶原组织中游离肽或结合肽的羟脯氨酸含量降低,因此,测定动物皮肤羟脯氨酸的含量,可以判断皮肤的衰老程度。研究表明:人体成纤维细胞的胶原蛋白合成随老化而下降,〔3H〕-脯氨酸掺入羟脯氨酸进行成纤维细胞的胶原蛋白合成分析发现年老者合成能力下降47%(9)。本文研究结果显示,基质照射组皮肤羟脯氨酸含量降低,与基质非照射组比较差异有显著性(p<0.05),提示皮肤组织中羟脯氨酸的含量不仅可以判断皮肤的自然衰老,也可作为皮肤光老化的敏感指标之一。成功地建立了豚鼠皮肤光老化病理模型。
研究结果表明,绿茶面膜照射组与基质照射组比较,羟脯氨酸合量明显升高,有统计学意义(p<0.05),提示绿茶面膜能延缓豚鼠皮肤的光老化。因自由基的作用,直接影响基因表达,成纤维细胞合成胶原蛋白的能力降低。细胞内羟基化酶在自由基作用下发生大分子交联,失去羟化功能。使脯氨酸亦不能羟化为羟脯氨酸,均导致羟脯氨酸含量下降,推测绿茶面膜延缓豚鼠皮肤光老化的作用机制与其含茶多酚所具有的抗氧化作用有关。
    豚鼠光老化皮肤组织中,缬氨酸、苏氨酸、胱氨酸的含量较非照射组降低,绿茶面膜照射组缬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸、胱氨酸、精氨酶的含量又较基质照射组高。这些氨基酸含量的变化与皮肤的光老化还不明了,有待深入研究。
 
                       参考文献
1.Kligman  L, H,  Akin,  FJ, Kligman,  AM. The  contributions  of  UVA and  UVB  to  connective  tissue  damage  in  hairless  mice.  J. Invest,  Dermatol  1985 : (84) 272-276.
2.Gurish MF,   Roberts LK,  krueger  GG,  et al , The  effects  of  various  sunscreen  agents  on  skin  damage  and  the  induction  of  tumor  susceptibility  in mice  subjected  to  ultraviolet  irradiation. J , Invest. Dermatol.   1981: (76) 246-251.
3.方家麟、李光中、孙慧珍等,经长期紫外线照射后豚鼠皮肤的组织形态变化,中华皮肤科杂志,1991:24(!) 11-13。
4.Johuston  KJ,  et al.  Nltaviolet  radiation-induceol  connective  tissue  changes  in  the skin  of  hairless  mice.  J Invest Dermatol 1984:82 587-590
5.Stegmann H.  Determination of hydroproline . clin  chim,  Acta  1987;18(1):26~
6.Zohuson  RG. Biochemical  analysis  of  rabbit  articular  cartilage  using  an  amlno  acid  analyzer.  Clinical  orthopead   and  related  research 1990:  146 (4):216~
7.Picardo  M, Zompeita,  C,  Deluca  C,  et al. Squalene  peroxides  may  contribute  to  uv  light-induced  immunological  effects.  Photodermatol,  Photoimmunol, Photomed, 1991(8):105-110.
8.李子浩,晏良军,赵保路等,茶多酚清除自由基和抗氧化作用的研究环境科学。1992:11,13-19。
9.陈可冀,李春生主编。新编抗衰老中药学。 北京:人民卫生出版社  1998、137。
 
★中国轻工总会科技发展部
  轻工业科技计划项目合同。合同编号:轻科96028
 
 
  
 
联系方式 | 管理入口
版权所有 梦泉中医养生网  E-mail:hemengquan@126.com